流行性乙型脑炎病毒SA14—14—2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析

目的获得JEV E蛋白基因并使其在E.coli中高效表达,以研究其抗原活性,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础.方法根据已发表的JEV SA-14-14-2减毒株序列,设计一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段,并将其克隆入pET-32a(+)表达载体中,构建重组融合表达载体pET-E,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达.结果扩增的E蛋白基因片段长1113bp,编码371个氨基酸残基,该基因片段与国内发表的减毒株SA14-14-2碱基序列同源性为100%.表达产物分子量约为62kD,经Western blotting分析表明表达产物具有较好的抗原性.结论通过序列分析表明,我国的JEV SA-14-14-2减毒株未发生基因突变.表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据.