lncRNA MRAK050699对二氧化硅粉尘诱导大鼠肺泡II型上皮细胞上皮-间质转换的影响

[背景] 矽肺发病机制未明且没有特效治疗方法，长链非编码RNA(lncRNA)在矽肺纤维化进程中或可发挥作用。 [目的] 探讨lncRNA MRAK050699对SiO2粉尘诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN细胞)发生上皮-间质转换(EMT)过程的影响。 [方法] 建立大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383细胞)与RLE-6TN细胞共培养体外矽肺模型，分为正常组、模型组、敲减对照组、敲减组。采用CCK8法检测NR8383细胞在10、20、40、80、160、320μg·cm-2 SiO2粉尘刺激下的活力，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测在0、20、40、80μg·cm-2粉尘刺激下的转化生长因子-β(TGF-β)含量，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MRAK050699敲减效率。取四个6孔板，在前两个6孔板中正常培养RLE-6TN细胞24 h，后两个6孔板分别培养转染阴性对照病毒的RLE-6TN细胞24 h，和转染敲减MRAK050699病毒的RLE-6TN细胞24 h；同时在另四个6孔板中，插入Transwell小室，正常培养NR8383细胞24 h。NR8383细胞与RLE-6TN细胞铺板比例为1∶2，之后将Transwell小室连同NR8383细胞一同转入RLE-6TN细胞的6孔板中，向后三组共培养体系的Transwell小室中加入40 μg·cm-2 SiO2粉尘悬液150 μL后，四组同时继续培养24 h，取Transwell小室下室的RLE-6TN细胞置于显微镜下观察，使用Western blotting及RT-qPCR法检测E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平。 [结果] CCK8、ELISA法结果显示SiO2剂量在40 μg·cm-2时，细胞活力下降较为明显且可保证后续实验的有效进行，上清液中TGF-β表达水平是对照组的2.94倍，可用于后续实验；敲减组MRAK050699的表达水平相比敲减对照组明显下调，敲减效率约为50%(P 0.05)。 [结论] MRAK050699在矽肺纤维化中发挥着重要的作用，可能参与了SiO2诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT过程。