Avaliação da nefrotoxicidade causada pela anfotericina B utilizando linhagens celulares LLC-PK1 e MDCK.2

Anfotericina B (AmB), um antibiotico da classe dos macrociclicos polienos, e um dos antifungicos mais efetivos no tratamento de infeccoes fungicas sistemicas. Entretanto, seu uso e frequentemente limitado pela ocorrencia de efeitos adversos, especialmente nefrotoxicidade. A nefrotoxicidade induzida por farmacos e um dos efeitos mais frequentemente observados em farmacoterapias de longo prazo. Essas situacoes tem sido descobertas tardiamente devido aos metodos atuais para determinacao da toxicidade. O presente estudo teve por objetivo propor metodos alternativos in vitro para identificacao precoce da toxicidade celular causada pela Anfotericina B. Para tanto, duas linhagens celulares renais, LLC-PK1 (tubulo proximal) e MDCK.2 (tubulo distal), foram expostas a nove diferentes concentracoes (2, 4, 6, 8, 10, 12, 15, 20 e 30 ig/mL) de AmB durante 24 horas. Os testes de expressao genica foram realizados de acordo com os resultados do ensaio de MTT. Um grupo de genes nefrotoxicos sensiveis e especificos foi escolhido com base em estudos anteriores in vitro e in vivo. A busca de sequencias de mRNAs que codificam proteinas, previamente associados com danos renais, foi realizada nas bases de dados do National Center for Biotechnology Information - NCBI (EUA). O RNA total foi extraido a partir das celulas expostas e foi realizado RT-PCR para avaliar o perfil de expressao diferencial dos genes selecionados. Os genes com a maior expressao incluem: HAVCR1 (Kim-1), CASP3, ANXA5 e VDAC.