Technique de quantification de la densité en fibres nerveuses intra-épidermiques (DFNIE) appliquée à la souris

Les neuropathies des petites fibres (NPF) sensitives sont caracterisees par une atteinte predominante des fibres nerveuse de petit calibre myelinisees (A-delta) ou amyeliniques (C). La NPF constitue le mode d’atteinte neurologique electif des amyloses systemiques genetiques (TTR) ou dysglobulinemiques. La methode de reference de diagnostic de NPF est la technique de quantification de la densite en fibres nerveuses intra-epidermique (DFNIE) sur biopsie cutanee. Le developpement de modeles murins d’amylose requiert la mise au point de methodes simples et reproductibles d’evaluation de la DFNIE chez la souris. Nous applique la technique de quantification de la DFNIE sur des prelevements de peau plantaire de patte arriere chez 31 souris C57.Bl6 femelles âgees de 2, 6 et 10 mois (prelevement d’un coussinet plantaire au punch de 3 mm ou prelevement au scalpel). Les prelevements cutanes ont ete fixes au PFA 4 % pendant 3 h puis cryopreserves dans le sucrose 10 % overnight . Le prelevement a congele a −80 °C en OCT dans l’isopentane. Les fibres nerveuses ont ete visualisees par immunomarquage de la proteine panaxonale PGP9.5 par immunofluorescence en FICT sur coupe epaisse (50 μm). La quantification de la DFNIE a ete realisee en comptant le nombre d’axone croisant la jonction dermo-epidermique par unite de longueur. La DFNIE plantaire sur coussinets plantaires etait de 64,6 ± 5,3 fibres/mm a 2 mois ( n  = 5), 58,2 ± 10,2 fibres/mm a 6 mois ( n  = 10), et 52,3 ± 11,9 fibres/mm a 10 mois ( n  = 6). La DFNIE tend a diminuer avec l’âge de 2 a 10 mois ( p  = 0,06). Le prelevement au scalpel (2 mois, n  = 10) montre une DFNIE heterogene variant de 7,06 a 83,7 fibres/mm, dependant de la zone de peau analysee. Notre technique de quantification de la DFNIE sur biopsie par punch-biopsie cutanee s’avere fiable et parfaitement applicable a l’etude de modeles murins de neuropathie sensitive.