双拷贝v- cath 基因的重组AcMNPV的构建与功能

利用AcMNPV穿梭载体Bac-to-Bac系统构建了分别由杆状病毒极早期基因 ie1 启动子和极晚期基因 ph 启动子控制的AcMNPV组织蛋白酶基因v- cath 表达的两种双拷贝重组杆状病毒.用这两种重组病毒感染细胞和幼虫,研究了不同时相v- cath 基因的表达及细胞和幼虫死亡的机理.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明:在感染Sf9细胞12h后(12 h pi),重组病毒dciAcMNPV的晚期基因v- cath 在早期基因 ie1 启动子驱动下得到表达.到48h pi,重组病毒dcdAcMNPV中v- cath 基因在晚期和极晚期 ph 启动子驱动下高水平表达.阴性对照v- cath 缺陷型病毒(ncAcMNPV)则没有V-CATH蛋白表达. 毒力实验表明它们的杀虫活性大小依次为dcdAcMNPV> dciAcMNPV>野生型AcMNPV>ncAcMNPV. 根据双拷贝重组病毒的毒力和幼虫的死亡特征,AcMNPV的v- cath 基因是一个毒力辅助因子和与虫体液化死亡有关的基因.所构建的重组病毒dcdAcMNPV由于是通过改变病毒自身基因的表达时相和拷贝数而提高了杀虫效率,因而不存在田间释放时的安全性隐患,有望成为一种新型的病毒杀虫剂.