利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽草酰-3-磷酸合酶（EPSPS）基因

为探索利用宏基因组文库筛选草甘膦不敏感的5-烯醇式丙酮莽革酰-3-磷酸合酶（EPSPS）基因，直接从土壤中提取细菌DNA，构建草甘膦污染土壤细菌宏基因组文库，并利用EPSP合酶缺失突变株ER2799筛选到4个能互补EPSP合酶功能的克隆，其中两个克隆的转化子能够在含5mmol／L草甘膦的MOPS培养基上生长。测序结果表明它们均含有完整的EPSP合酶编码基因，GT-1aroA核苷酸长度为1335bp，编码445个氨基酸，GT-4aroA核苷酸长度为1350bp，编码450个氨基酸。利用PCR方法将两个基因克隆到原核表达载体pET28a上后，可以使宿主细胞BL21（DE3）在含100mmol／L草甘膦的MOPS培养基中良好生长。上述结果表明，利用宏基因组文库筛选方法可以得到高抗草甘膦的EPSPS基因。