H7-HCP-Tir-Intimin高效降低小鼠粪便中大肠杆菌O157：H7排菌

构建BL21（PcoldI-fliC-hcpA-tir-eae），并评价对小鼠的免疫原性，以期研制更加有效的候选免疫原，最大限度降低E．coli0157：H7对食物、环境和人类的危害。将946、423、309、811bp的fliC，hcpA，tir和ecte基因被依次克隆，中间添加8个氨基酸的间隔序列，构建重组菌BL21（PcoldI—fliC-hcpA—tir-eae）。进口白油和ISA50V作为佐剂重组蛋白乳化，制备2种油乳剂疫苗，分别接种4周龄BALB／c雄鼠，二免21d，口服攻击E．coli O157：H710^9CFU／只，每天采集粪便，检测排茵。结果显示，2种重组疫苗均能够诱导高滴度血清IgG。ISA50V佐剂组抗体产生早于进口白油佐剂组，但进口白油佐剂组抗体滴度一致性更好。所有免疫组小鼠排菌极度降低，第1天排菌低于10^4CFU／g，第5天检测不到排菌，整个检测期无反弹，而对照组在整个检测期排菌持续很高（〉10^4CFU／g）。结果表明，四价重组蛋白H7-HCP—Tir-Intimin能够高效降低口服大肠杆菌0157：H7后的排菌，极显著降低细菌的定植，很大程度减少病原传播，对环境和人类的威胁。