SPIO、GFP双标NT-3基因修饰中脑神经干细胞的建立

目的 建立超顺磁氧化铁（superparamagnetic iron oxide，SPIO）、绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）双标神经营养素3（neurotrophin 3，NT-3）基因修饰中脑神经干细胞。方法 以质粒pcDNA3-NT3、pGFPN1共转染第三代E14大鼠胚胎中脑神经干细胞并用SPIO标记。荧光显微镜检测GFP的表达；免疫细胞化学、western blot鉴定NT-3的表达；普鲁士蓝染色、透射电镜鉴定SPIO标记。结果 GFP在基因转染12h后开始表达；免疫细胞化学、western blot表明细胞能正确表达NT-3；普鲁士蓝染色显示细胞标记率达100％，透射电镜显示SPIO颗粒位于吞饮小泡和胞浆内。结论建立SPIO、GFP双标NT-3基因修饰中脑神经干细胞，为进一步开展帕金森病的细胞移植治疗研究奠定基础。