逆转录环介导等温核酸扩增技术（RT-LAMP）在H5N1禽流感病毒基因检测中的应用

建立一种便捷、灵敏的检测方法，即逆转录环介导等温核酸扩增技术（RT—LAMP）用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测。该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物，在等温条件下进行核酸扩增反应。对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA、NA基因区进行了RT—LAMP检测，并以SYBR Green I为反应指示剂进行了逆转录环介导等温核酸扩增技术，对该反应进行实时监控，经对扩增产物做内切酶验证和测序分析，证明RT—LAMP技术的特异性；同时，用10倍系列稀释的RNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示：利用RT—LAMP技术成功检测到H5N1禽流感病毒的HA、NA基因区，且RT—LAMP与Real—time PCR结果呈现很好的一致性。此方法的灵敏度可达到能检测10个拷贝RNA分子水平。因此，RT—LAMP技术应用于H5N1亚型禽流感病毒的快速检测是一种可行的方法。