Protocolo molecular para obtener cepas vacunales atenuadas en su virulencia de Salmonella entérica Serotipo Enteritidis 82139

Se presenta el Protocolo Molecular para obtener cepas vivas atenuadas en su virulencia a partir de Salmonella enterica Serotipo Enteritidis 82139 (S. enteritidis 82139), como modelo de elaboracion de una cepa vacunal y la propuesta de modelos de biorreactores con fines de su produccion. Se diseno y selecciono las cepas mutantes que permiten determinar la funcion genica de dsbA, dle y dlp en la capacidad de movilidad y de invasion bacteriana intracelular. Se obtuvieron cepas simples mutantes: 82139 C, 82139 I, 82139 2; cepas dobles mutantes: 82139 2C, 82139 2I y 82139 CI y la cepa triple mutante: 82139 2CI, con sus cepas control de expresion dle:82139 2CI pSTB1dle y 82139 pSTB1. Para la obtencion y construccion de las cepas mutantes se usaron las tecnicas: PCR, Electroforesis, electrolucion, secuenciacion, clonacion, extraccion plasmidica, minipres y maxipres de vectores monocopia y multicopia, recombinacion genetica por transformacion y transduccion, titulacion de fagos, construccion de vectores, tecnicas de interrupcion y complementacion genica. La cepa doble mutante 82139 2C, carente de los genes dsbA y dlp y la triple mutante 82139 2CI carente de los genes dsbA, dlp y dle, se constituyen en potenciales recursos geneticos para ser usados como cepas vacunales debido a que los genes mencionados codifican las proteinas TDOR: DsbA, Dlp y Del, respectivamente. El trabajo establece las bases para proponer un protocolo Celular para ensayos in vitro en la determinacion de infecciones bacterianas en lineas celulares y que reemplace a los ensayos in vivo.