CARACTERIZAÇÃO NEUROBIOLÓGICA DO VENENO DO SAPO RHINELLA ICTERICA EM VERTEBRADOS

Os venenos animais sao ricas fontes de compostos bioativos com aplicabilidade terapeutica. Os sapos sao animais que possuem glândulas paratoides espalhadas pelo corpo, que produzem uma secrecao venenosa de interesse biotecnologico. Os sapos da especie Rhinella icterica (Spix, 1824) pertencem a um grupo de animais venenosos presentes no bioma Pampa, os quais ainda carecem de um estudo farmacologico e toxicologico. Neste trabalho, foi feito um estudo sobre a atividade do veneno de R. icterica (RIV) em preparacoes neuromusculares de aves, bem como sobre o sistema nervoso central de camundongos. Os sapos foram coletados na regiao de Derrubadas, noroeste do estado do Rio Grande do Sul e o veneno extraido manualmente por compressao das glândulas paratoides. O veneno para uso nos ensaios biologicos foi tratado por extracao metanolica seguida de liofilizacao. Foram utilizados camundongos Swiss adultos de ambos os sexos (25 – 30 g) para obtencao de fatias de hipocampo e pintainhos Hyline (1 – 10 dias), para as preparacoes de juncao neuromuscular de biventer cervicis. O ensaio colorimetrico MTT foi realizado nas fatias hipocampais em presenca ou ausencia do extrato metanolico, conforme descrito por Dal Belo et al. (2013). A preparacao neuromuscular biventer cervicis foi realizada como descrito por Ginsborg & Warriner (1960) para obtencao dos registros eletromiograficos. Os dados foram expressos como media ± E.P.M. Diferencas foram validadas por ANOVA post hoc Tukey com p < 0.05 indicando significância. A incubacao de RIV (5, 10, 20, 40 µg/mL) em fatias de hipocampo de camundongos, induziu um efeito dose dependente na viabilidade celular. Assim, apenas a concentracao de RIV 5 µg/mL induziu um aumento da viabilidade celular (36 ± 10%), quando comparado com o controle Hepes (n=6, p < 0.05). Em preparacoes neuromusculares de pintainhos, RIV (5, 10 µg/mL) produziu um efeito facilitatorio seguido de bloqueio neuromuscular em 120 min de registro. RIV 10 µg/mL induziu um aumento maximo na resposta contratil (58 ± 12%, p < 0.05) e maximo bloqueio (80±7%, p < 0.05, n = 8). Neste conjunto de experimentos, a incubacao dos musculos com Digoxina 0,5 nM ou Ouabaina 0,2 nM mimetizou a atividade do veneno com aumento da amplitude de contracao por 19 ± 3% e 30 ± 2%, e diminuicao da contracao muscular de 86 ± 2% e 91 ± 5%, respectivamente (p < 0.05, n = 5). O aumento da viabilidade neural com o veneno de R. icterica em sistema nervoso central (SNC) de mamiferos indica um potencial terapeutico para o veneno, porem novos experimentos sobre esta atividade devem ser conduzidos. O veneno de R. icterica induziu neurotoxicidade periferica em vertebrados, antecedido por uma facilitacao momentânea. As similaridades entre a atividade biologica do veneno de R. icterica e Ouabaina ou Digoxina em preparacoes neuromusculares, sugerem um mecanismo de bloqueio da bomba de Na+/K+ ATPase nessas sinapses.