Assessment of HPLC-FLD Method for Determination of Trastuzumab

Trastuzumab (150kDa), insan epidermal buyume faktoru reseptoru-2'ye (HER2) karsi yonlendirilen ve metastatik meme kanseri tedavisi goren hastalarda kullanilan bir monoklonal antikordur (mAb). Bu biyobenzer ilaclarin tedavide kullanilabilmesi icin biyoesdegerlik calismalarinin yapilmasi gereklidir ve bu calismalarin basarisi da analitik yontemin guvenilirligine baglidir. Bu calismada, fluoresans dedektoru (FLD) ile birlestirilmis yuksek performansli sivi kromatografisi (HPLC) kullanarak toplam Trastuzumab analizi icin bir biyoanalitik yontem tanimlanmistir. Trastuzumab, protein G kolonu kullanilarak sican serumundan izole edildikten sonra glisinle elue edilerek, eluent, uyarma ve emisyon dalga boylarinin sirasiyla 278 ve 343 nm'ye ayarlandigi HPLC sistemine enjekte edilmistir. Akis hizi, kolon turu hareketli faz turu ve bilesimi ve ornek hazirlama asamasinda kullanilan eluent gibi deneysel parametreler, piklerin ayrilmasi ve geri kazanim yuzdeleri dikkate alinarak optimize edilmistir. Optimum kosullar altinda kalibrasyon grafigi olusturulmus ve belirtme alt siniri 5.3 µg/mL olarak hesaplanmistir. Bu yontemin farmakokinetik calismalar icin uygulanabilirligi tartisilmistir.