Desarrollo de sistemas de inmunodetección para la determinación de analitos de interés clínico y medioambiental

En la presente Tesis Doctoral se ha llevado a cabo el desarrollo y optimizacion de distintos disenos de inmunosensores para su aplicacion practica en la determinacion de analitos de interes tanto clinico como medioambiental (digoxina y atrazina respectivamente). En primer lugar, aunque no puede considerarse un inmunosensor en su sentido mas estricto, se plantea el desarrollo de un metodos inmunoanalitico para la determinacion en continuo del pesticida atrazina utilizando un sistema por inyeccion en flujo (FIA) con deteccion fluorimetrica. La facil automatizacion del procedimiento analitico mediante un sistema FIA junto a la ausencia de la necesidad de esperar el equilibrio de la reaccion antigeno-anticuerpo, gracias al estricto control de las distintas etapas que permite este sistema, hace atractiva la aplicacion de este diseno para la determinacion de un pesticida de espeical interes como es el caso de la atrazina. Una segunda configuracion que se acerca mas al concepto de inmunosensor, implica la adaptacion de un metodo ELISA directamente sobre la superficie de un transductor, en este caso electroquimico. La inmovilizacion del anticupero especifico junto a un polimero redox en una estructura tridimensional permite determinar la magnitud de la reaccion inmunologica mediante el acoplamiento de la transferencia de electrones inherentes al ciclo catalitico de la enzima conjugada, utilizada como marcador, con la superficie electrodica. Atrazina y digoxina con sus respectivos requerimientos analiticos son los analitos determinados con este inmunosensor. Finalmente, basado en la formacion de una estructura ordenada y modular en forma de monocapas sobre la superficie de un electrodo, se desarrolla un inmunosensor amperometrico para la deteccion del analito digoxina. En esta arquitectura, las distintas biomoleculas y el polimero redox se depositan en sucesivas capas autoensambladas retenidas por inter