Etude génétique des pectates lyases d'une bactérie phytopathogène, ERWINIA CHRYSANTHEMI et transformation de cette bactérie

Le but poursuivi dans ce travail etait de preciser au niveau moleculaire les determinants du pouvoir phytopathogene de l'enterobacterie Erwinia chrysanthemi et d'aborder l'analyse des mecanismes de regulation intervenant dans l'expression de cette pathogenicite. E. Chrysanthemi produit des enzymes pectinolytiques qui sont les principales responsables de l'activite maceratrice sur les vegetaux. Une banque genomique de cette bacterie a d'abord ete construite dans laquelle nous avons identifie une region pe1 composee de trois genes distincts pe1A, pe1D, pe1E codant pour trois pectinases. La caracterisation physique de cette region nous a conduit a la connaissance de l'organisation des genes~ les uns par rapport aux autres et a montre qu'il s'agit de trois unites de transcription independantes. Chaque gene a ete isole~par des experiences de sous-clonage,sur des fragments d'ADN de 217 a 516 kb. L'un de ces genes pe1EJa ete fusionne a l'operon lac d'Escherichia coli ; l'etude de ces fusions de genes a abouti a la determination du sens de transcription du gene pe1E. Enfin, l'introduction de ces fusions dans E. Chrysanthemi par une methode de transformation que nous avons mise au point, a permis d'aborder la regulation du gene pe1E. Par ailleurs, ce travail peut s'inscrire en preliminaire a la production industrielle de pectinases.