Produção, caracterização e purificação de beta-glicosidases fúngicas e sua ação sobre a hidrólise de amigdalina, celobiose e p-nitrofenil-beta-glucopiranosídeo

As s-glicosidases (s-D-glucosideo glucohidrolase, EC 3.2.1.21) catalisam a hidrolise de dissacarideos e glicosideos conjugados a partir da extremidade nao redutora. A enzima s-glicosidase apresenta inumeras aplicacoes na industria de alimentos e farmaceutica, atuando na hidrolise da celobiose em glicose, no processo de conversao da celulose em glicose em combinacao com outras enzimas celuloliticas; na liberacao de compostos de aroma em sucos de frutas e vinho; na hidrolise de compostos cianogenicos, presentes em plantas e residuos agroindustriais e na transformacao de isoflavonas glicosiladas de soja em isoflavonas agliconas, que podem ser utilizadas para reposicao hormonal. Entre as linhagens de Aspergillus sp., Aspergillus oryzae, Mucor miehei, Penicillium sp. E Trichoderma viride a primeira apresentou a maior producao de s-glicosidase. Na fermentacao da linhagem Aspergillus sp. em meio semi solido composto de farelo de trigo (Natur?s): casca de maracuja: agua destilada, na proporcao 1:1:0,4; foram obtidos, respectivamente, 25,75 U/g, 45,88 U/g e 9,29 U/g de s-glicosidase utilizando-se os substratos p-NPG, celobiose e amigdalina, apos 30 minutos a 50°C. A s-glicosidase bruta de Aspergillus oryzae apresentou atividade otima na faixa de pH 5,0 - 5,5 e uma fracao com atividade em pH 7,0. A enzima apresentou temperatura otima de atividade na faixa de 45 - 50°C e mostrou-se estavel a 45°C apos 30 minutos de incubacao em pH 5,0 e na faixa de pH 5,0 - 7,0 apos 2 h a 47°C. A s-glicosidase bruta de Penicillium sp. apresentou atividade otima em pH 4,0 a 50°C e a 60oC, evidenciando a presenca de iso enzimas. Mostrou-se estavel a 55°C apos 30 minutos de incubacao em pH 5,0 e apr esentou maior estabilidade na faixa de pH 3,0 - 7,0 apos 2 h a 60°C. A s-glicosidase bruta de Trichoderma viride mostrou atividade otima em pH 5,0 - 5,5 e 45oC e mostrou-se estavel a 45°C apos 30 minutos de incubacao em pH 5,0 e na faixa de pH 5,0 - 7,0 apos 2 h a 45°C . A s-glicosidase bruta de Aspergillus sp. apresentou atividade otima em pH 4,5 e 60°C, estabilidade a 60°C apos 30 minutos de incubacao em pH 4,5 e na faixa de pH 3,0 - 8,5 apos 2 h de incubacao a 60°C. A s-glicosidase de Aspergillus sp. apresentou valores de Km de 3,41 mM e Vmax de 72,46 µmol p nitrofenol/mL.min para o substrato p-NPG. Apos fracionamento com sulfato de amonio 80% e cromatografia em coluna DEAE-celulose, a s-glicosidase de Aspergillus sp. foi parcialmente purificada cerca de 38 vezes com recuperacao de 2,5%. Utilizando-se planejamento experimental a s-glicosidase parcialmente purificada apresentou atividade otima em pH 4,5 e 60°C e estabilidade na faixa de pH de 3,6 - 5,0 e temperatura de 30 - 50°C apos 2 h de incubacao. A s-glicosidase parcialmente purificada de Aspergillus sp. apresentou atividade de hidrolise da celobiose, p-NPG e amigdalina Abstract