A S-nitrosação do mTORC1 reduz a proliferação de linhagens tumorais humanas

A S-nitrosacao e uma modificacao pos-traducional dinâmica e reversivel de proteinas que controla importantes funcoes celulares atraves da alteracao de residuos tiois de cisteinas pelo oxido nitrico (NO). Assim como a fosforilacao, a S-nitrosacao e capaz de alterar a conformacao, a atividade e a funcao de proteinas e contribui em grande parte para a influencia ubiqua do NO nas vias de transducao de sinal celulares. Inumeras evidencias apontam para um papel crucial da S-nitrosacao nao apenas na fisiologia dos organismos, mas tambem em inumeras doencas humanas, entre elas o câncer. Entretanto, trata-se de um mecanismo ainda pouco explorado de modulacao de proteinas envolvidas com a progressao tumoral, como as presentes na via do mTOR. Assim, o objetivo do trabalho e analisar os mecanismos pelos quais o NO afeta a funcao do mTOR. A analise da S-nitrosacao do mTOR foi realizada atraves do Biotin Switch Method e demonstra que o doador exogeno de NO, GSNO, aumenta os niveis de mTOR S-nitrosada. Alem disso, a GSNO reduz a fosforilacao das proteinas mTOR, p70S6K e 4EBP-1 de forma tempo- e dose-dependente. A fosforilacao da proteina p70S6K, reduzida pela exposicao ao NO, e restaurada pela adicao do agente redutor e denitrosante DTT. Entretanto, o pre-tratamento das linhagens celulares PC-3, DU145 e MCF-7 com o inibidor da guanilil ciclase, ODQ, ou com o sequestrador de NO livre, PTIO, nao reverte o efeito da GSNO na fosforilacao das proteinas mTOR, p70S6K e 4EBP-1, corroborando a hipotese de que o mTORC1 e modulado por S-nitrosacao. A viabilidade das linhagens tumorais humanas PC3, DU145, MDA-MB-468, MCF-7, HT-29, CACO-2 e A549 tambem diminui apos exposicao aos doadores de NO, sendo observada reducao da proliferacao e aumento da morte celular. As linhagens PC-3, MCF-7 e MDA-MB-468, que apresentam mutacoes ativadoras na cascada de sinalizacao PI3K-mTOR, sao mais sensiveis a presenca do NO. Assim, a S-nitrosacao do mTORC1 e uma importante modificacao pos-traducional capaz de modular a atividade quinase da proteina mTOR e reduzir a proliferacao de celulas tumorais humanas, apresentando potenciais implicacoes terapeuticas. Abstract