Vermehrungskinetik und Verwendbarkeit eines stark zytopathogenen VD‐MD‐Virusstammes für diagnostische Untersuchungen mit der Mikrotiter‐Methode

Zusammenfassung Aus einem an VD-MD-ahnlichen Erscheinungen erkrankten Jungrind wurde ein isoliertes Agens durch den Virusplaque-Reduktionstest und den Serumneutralisationstest mit der Mikrotiter-Methode als VD-MD-Virus identifiziert. Seine serologische Verwandtschaft zu dem Virusstamm Oregon C 24 V wurde festgestellt. Der isolierte Virusstamm zeigte von allen bisher untersuchten Stammen die kurzeste Vermehrungszeit. Die hochsten Konzentrationen an freigesetztem und zellgebundenem Virus waren nach 48 Stunden p. i. erreicht. Ebenso fruhzeitig kam es zur Ausbildung eines vollstandigen zytopathogenen Effektes. Die Technik der Titration des isolierten Virus und der Titration von VD-MD-virusneutralisierenden Antikorpern mit Hilfe der Mikrotiter-Methode wurde beschrieben. Die Methode erwies sich sowohl mit sekundaren Kalberhoden- als auch mit fotalen Kalbernierenzellen im sog. Simultanverfahren (gleichzeitige Einsaat der zu testenden Reagentien mit der Zellsuspension) fur die Diagnostik als geeignet. Summary Growth curve studies and applicability of a highly cytopathogenic BVD-MD-virus-strain for diagnostic purposes using the micro-titre method An agent isolated from a heifer with signs of bovine virus diarrhoea mucosal disease was identified as BVD-MD virus (strain A 1138/69) by the plaque-reduction test and 50 % end-point method. A serological relationship with the Oregon C 24 V variant strain of BVD-MD virus was established. The strain A 1138/69 exhibited the shortest time of viral multiplication compared with other strains of BVD-MD virus. Highest concentrations of extra-cellular as well as cell-bound infectious virus were reached 48 hours after culture inoculation and this correlated with the time necessary for a complete cytopathogenic destruction of monolayer cell cultures. The techniques of titration of the virus and titration of BVD-MD virus neutralising antibodies by the micro-titre method are described. This method has proved suitable for diagnostic purposes not only with secondary testicular calf cells but also with foetal calf kidney cells, using the so-called simultaneous procedure (simultaneous inoculation of the test reagent and the cell suspension). Resume Multiplication et epplicabilite d'une souche virale VD-MD fortement cytopathogene pour le diagnostic par la methode de microtitration A l'aide du test de reduction de plaques et du test de neutralisation serique par la methode de microtitration, on identifie un virus VD-MD a partir d'un agent isole chez un jeune boeuf presentant des symptomes ressemblant a la VD-MD. On peut etablir sa parente serologique avec la souche virale Oregon C 24 V. La souche virale isolee manifeste un temps de propagation plus court que les souches examinees jusqu'alors. 48 heures p. i., on atteint les plus fortes concentrations en virus libre et virus cellulaire. Un effet cytopathogene complet se developpe aussi rapidement. On decrit la technique de la microtitration du virus isole et de la microtitration des anticorps neutralisant le virus VD-MD. Cette methode se revele appropriee pour le diagnostic, non seulement avec des cellules testiculaires secondaires de veaux, mais aussi avec des cellules foetales de reins de veaux, dans le procede dit “simultane” (inoculation simultanee des reactifs a tester et de la suspension cellulaire). Resumen Multiplicacion y posibilidad de empleo de una estirpe de virus VD-MD citopatogena extrema para estudios diagnosticos con la tecnica de microtulacion En una becerra enferma, con sintomas parecidos a los de la diarrea virica-enfermedad mucosa, se identifico un agente aislado, mediante la prueba de reduccion del plaque de virus y de la de seroneutralizacion con la tecnica de microtitulo, como virus VD-MD. Se establecio su parentesco serologico con la estirpe de virus Oregon C 24 V. La estirpe de virus aislada mostraba entre todas las estirpes examinadas hasta la fecha el tiempo de multiplicacion mas breve. Las concentraciones mas elevadas en virus liberado y ligado a la celula se alcanzaron al cabo de 48 horas p. i. Tambien precoz fue la formacion de un efecto citopatogeno total. Describense las tecnicas de titulacion del virus aislado y de la titulacion de anticuerpos neutralizantes de virus VD-MD con ayuda del metodo de microtitulo. El metodo resulto apropiado para el diagnostico tanto con celulas secundarias de testiculos de ternero como con fetales de rinones de ternero en el procedimiento llamado simultaneo (siembra a la par de los reactivos a analizar con la suspension celular).