应用dtSCT技术制备低亲和力抗原肽InsB/15-23肽的MHCI四聚体

目的制备低亲和力InsB/15-23抗原肽的MHCI四聚体。方法应用二硫键捕获型单链三聚体（disulfide—trap single—chain trimer，dtSCT）技术，将InsB/15-23抗原肽、小鼠B2微球蛋白（β2-microglobulin，β2m）和H-2Kd分子以柔性接头（1inker，L）依次连接，并在抗原肽的C末端与H一2Kd分子间引入了二硫键，以提高抗原肽与H-2K。分子结合的稳定性。融合基因克隆入pET-22b原核表达载体，经过诱导表达、洗涤包涵体、稀释复性等步骤获得单体，生物素化后制成InsB/15-23 dtSCT型四聚体。结果我们比较了自制InsB/15-23 dtSCT四聚体和商品化G9V传统五聚体对小鼠外周血特异性CTLs的检出率。2种多聚体对阴性对照Balb／c小鼠都显示m很低的非特异性标记水平，都能检出4周龄NOD母鼠外周血中低水平的InsB/15-23特异性CTLs，且二者的检出率无统计学差异。结论我们成功制备出稳定的InsB/15-23 dtSCT型四聚体。与商品化的传统五聚体相比，我们自制的四聚体具有类似的检出率和低非特异性标记水平。