A practical approach on boar sperm cryodamage. Morphofunctional and immunocytochemical study of cryopreserved boar sperm intended for use in artificial insemination

L'us d'esperma criopreservada en la inseminacio artificial (IA) d'especies d'interes productiu permet un major control sanitari i la creacio de bancs de germoplasma d'alt valor genetic, entre d'altres avantatges. En el mercat porci la major part de les inseminacions son encara realitzades amb semen refrigerat degut a l'exit de l'aplicacio de diluents de llarga durada i tambe a causa de la sensibilitat de l'esperma porcina a la criopreservacio. Malgrat que aquesta sensibilitat ve donada per caracteristiques particulars de la fisiologia espermatica en l'especie, algunes ejaculacions mantenen els parametres de qualitat espermatica despres de la criopreservacio (ejaculacions amb bona "congelabilitat", GFEs) enfront d'altres que no sobreviuen al proces (ejaculacions amb mala "congelabilitat", PFEs). El primer objectiu de l'estudi va ser comparar ambdos grups en termes de fertilitat in vivo. El segon objectiu va ser testar l'eficiencia de la inseminacio postcervical (post-CAI) amb l'esperma criopreservada. El tercer objectiu va ser buscar predictors de la congelabilitat de les ejaculacions, tant en les GFEs com en les PFEs i en tres passos del proces de criopreservacio (a 17oC, a 5oC i a 240 min postdescongelacio). Aquest objectiu es va dur a terme mitjancant l'avaluacio de parametres convencionals de qualitat espermatica i a traves de l'estudi de la localitzacio i la reactivitat sota el microscopi de tres proteines (GLUT3, HSP90AA1 i Cu/ZnSOD) relacionades amb la fisiologia espermatica i amb possibles rols en la congelabilitat. El quart objectiu va ser quantificar l'expressio de les tres proteines per transferencia western, tant en espermatozoides d'ejaculacions GFEs com en els d'ejaculacions PFEs i en els tres passos abans esmentats, per tal de determinar el seu potencial com a predictores de la congelabilitat. Pel primer i el segon objectiu, 86 truges van ser inseminades per post-CAI amb 26 ejaculacions de mascles Pietrain dividides en una porcio refrigerada a 17oC (tractament control) i una porcio criopreservada, ambdues porcions classificades alhora com a GFEs o PFEs. Els resultats mes rellevants van demostrar que les probabilitats d'embaras eren dues vegades menors en inseminacions amb esperma criopreservada d'ejaculacions PFEs (P < 0.05) que en inseminacions amb esperma criopreservada d'ejaculacions GFEs, fet que indica que les ejaculacions amb percentatges elevats d'espermatozoides mobils progressius i d'integritat de membrana (per sobre del 40% en les GFEs) son mes favorables a provocar embarassos que no pas aquelles ejaculacions amb una pobra funcio espermatica in vitro (PFEs). Ni el nombre de truges que van donar a llum, ni la quantitat de garrins, ni el risc de reflux espermatic van ser significativament diferents entre les inseminacions amb esperma criopreservada d'ejaculacions GFEs i les inseminacions control amb semen refrigerat, la qual cosa demostra la bona aplicabilitat de la inseminacio post-CAI amb l'esperma criopreservada. Finalment, pel tercer i quart objectius van ser criopreservades 29 i 11 ejaculacions de mascles Pietrain, respectivament. Dos parametres cinetics espermatics, la linealitat (LIN) i la rectitud (STR), van mostrar una hiperactivacio de la mobilitat superior en les ejaculacions PFEs que en les GFEs despres de 30 min a 5oC durant la criopreservacio. A mes, la combinacio d'ambdos parametres va donar una fiabilitat propera al 72% en la prediccio de la congelabilitat de les ejaculacions porcines. Tot i que no va ser possible predir la congelabilitat mitjancant l'avaluacio de les tres proteines al microscopi, els resultats de transferencia western van revelar diferencies en l'expressio de la HSP90AA1 en l'esperma a 17oC, molt possiblement relacionades amb la millor supervivencia a la criopreservacio dels espermatozoides d'ejaculacions GFEs. Aquests resultats suggereixen que la promocio de la criopreservacio d'esperma porcina per la seva aplicacio en IA passa pel desenvolupament de tests per la prediccio de la congelabilitat en semen refrigerat.