Aplicación de técnicas in vitro a la conservación de Thymus moroderi

Thymus moroderi Pau ex Martinez es un endemismo iberolevantino caracterizado por su uso tradicional como planta medicinal y como base para la aromatizacion de licores (cantueso). Esta especie esta catalogada como casi amenazada (NT) en la Lista Roja de la Flora Vascular Espanola. Hemos desarrollado de forma exitosa estrategias de conservacion ex situ para esta especie basadas en el cultivo in vitro que permiten tanto una conservacion a corto-medio plazo como a largo plazo. Para la conservacion in vitro de Thymus moroderi desarrollamos inicialmente un protocolo de micropropagacion a partir de segmentos nodales y apicales de material adulto. El inicio de cultivo a partir de material silvestre presento una elevada dificultad debido a altos indices de contaminacion y falta de crecimiento del material no contaminado. Sin embargo, una vez establecido el cultivo in vitro el material puede multiplicarse y enraizar en medio MS con sacarosa 30 g l-1 y agar 7 g l-1 sin necesidad de anadir reguladores del crecimiento. La aclimatacion de las plantulas enraizadas a condiciones ex vitro no presenta ninguna dificultad y es mayor del 90%. Para la conservacion a medio plazo recurrimos a tecnicas de crecimiento lento adicionando al medio de cultivo diferentes concentraciones de agentes osmoticos. Finalmente seleccionamos el medio MS con sacarosa 15 g l-1 y manitol 15 g l-1 combinado con oscuridad y baja temperatura (4 oC), lo que nos permitio mantener los explantos durante 29 semanas sin necesidad de ser subcultivados, antes de transferirlos a condiciones estandar de temperatura. Durante este periodo de almacenamiento a baja temperatura pudimos constatar el papel relevante de putrescina libre y conjugada y espermidina ligada en la adaptacion de las plantas a la baja temperatura. Para la conservacion a largo plazo desarrollamos tres tecnicas de crioconservacion: vitrificacion en gota, vitrificacion y encapsulacion-desecacion. La vitrificacion y vitrificacion en gota produjeron los mejores resultados, asi tras 60 y 30 min de deshidratacion en PVS2, respectivamente, se obtuvieron los porcentajes mas altos de supervivencia (80 y 71.4%). En material procedente de crioconservacion por vitrificacion realizamos un analisis de RAPDs con el fin de estudiar la estabilidad genetica del material crioconservado, obtuvimos un 0.34% de variacion. Finalmente, realizamos una primera aproximacion al estudio del perfil metabolico y de los aceites esenciales de material procedente de micropropagacion y crioconservacion.