调控Pokemon-p14ARF-p53通路对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

研究发现转录抑制因子Pokemon是一种关键性致癌因子，在多种人类恶性肿瘤中表达异常上调，在体内、外实验中均能促进细胞的肿瘤性转化。Pokemon对抑癌基因ARF具有特异性转录抑制作用。目的：应用RNA干扰技术抑制人结肠癌细胞株HT-29的Pokemon表达，观察其表达抑制对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能的分子机制。方法：根据PokemoneDNA序列设计干扰序列，构建重组干扰质粒，经脂质体介导转染入HT-29细胞。以realtimelit．PCR和蛋白质印迹法检测Pokemon、p14ARF、p53表达，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果：PokemonsiRNA能有效抑制HT-29细胞中的PokemonmRNA和蛋白表达，mRNA相对表达量为0．29±0．04，同时p14ARF、p53mRNA和蛋白表达明显上调，mRNA相对表达量分别为3．03±0．49和2．804-0．25。与转染无效序列siRNA的HT-29细胞相比，Pokemon表达抑制的HT-29细胞GO／G1期细胞比例增加（43．6％±2．3％对34．7％±1．9％，P〈0．05），细胞凋亡增多（10．7％4-1．9％对2．7％±0．4％，P〈0．05）。结论：人结肠癌细胞中的Pokemon表达与p14ARF、p53表达之间存在负相关关系，抑制Pokemon可通过上调p14ARF—p53信号通路阻滞肿瘤细胞的细胞周期进程，并诱导细胞凋亡。调控Pokemon—p14ARF—p53信号通路有望作为结肠癌的治疗靶点。