应用实时定量RT-PCR检测bcr-abl融合基因的表达

背景与目的：白血病患者经诱导化疗达完全缓解时髓外某些隐蔽处仍残存白血病细胞，这是白血病复发的根源。为了彻底治愈白血病，不仅要及时发现残存的白血病细胞，还要对其进行定量监测，以指导治疗和判断预后。本研究旨在建立检测bcr—abl融合基因的实时定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）体系，并采用此方法对bcr—abl融合基因进行定量分析。方法：通过RT—PCR扩增K562细胞bcr—abl融合基因，用T—A克隆法构建重组质粒作为标准品。绘制出bcr—abl的标准曲线，并对16例慢性粒细胞白血病患者骨髓标本进行bcr—abl融合基因进行定量。标定RT—PCR反应的敏感性、稳定性和重复性。结果：检测到10个拷贝的重组质粒。重复性及稳定性验证结果表明，Ct值变异系数分别为2．19％和3．21％，标准曲线的回归系数为0．984。16例慢性粒细胞白血病患者bcr—abl融合基因表达量的中位数为4．58×10^4kb／μg RNA。结论：实时定量RT-PCR具有高敏感性、重复性、特异性和稳定性，可以对bcr—abl融合基因进行定量监测。