Determinación de la presencia de genes cry en cepas nativas de Bacillus thuringiensis

A partir de dos tipos de muestras, suelo asociado a cultivos de papa (Solanum tuberosum) y polvo asociado a sitios de almacenamiento de granos (cereales) colectado en las centrales de Corabastos y Paloquemao en Bogota, se aislaron 88 cepas nativas de Bacillus thuringiensis bacilo grampositivo patogeno de insectos plaga de cultivos agricolas. De las 88 cepas obtenidas 57 de ellas se escogieron para separarlas posteriormente mediante subcultivos en virtud a sus caracteristicas fenotipicas al interior de la colonia llevando esto a obtener un numero de 145 cepas nuevas para un total de 176 cepas de B. thuringiensis caracterizadas  morfologicamente y por su patron de formas de las ICPs mediante microscopia de contraste de fases, y de las proteinas Cry arrojado por los perfiles de SDS-PAGE; en el total de cepas hubo presencia predominante de ICPs con forma romboide acompanadas por al menos otras dos formas distintas, y mostraron perfiles electroforeticos de proteinas de peso molecular entre el rango de 130, 116 y 60 kDa. Del total de cepas B. thuringiensis nativas aisladas en este estudio, 59 (30 de suelos y 29 de polvo) fueron analizadas mediante la tecnica PCR, encontrando que 100% de ellas son portadoras de alguno de los seis tipos de genes cry1 estudiados cry1Aa5 (71,2%), cry1Ab9 (66,1%), cry1Ac5 (45,8%), cry1Ba1 (39%), cry1Ca3 (49,1%), y cry1Da1 (71,2%); adicionalmente se observo la presencia de productos genicos inespecificos, posiblemente nuevos, amplificados por la PCR y relacionados con los genes cry1C (55,9%), cry1B (30,5%) y otros genes cry1 no estudiados por este metodo en al menos el 50% de las cepas estudiadas. De acuerdo con estos resultados se establecio un total de 19 genotipos diferentes segun los genes cry1 estudiados, presentados por las cepas nativas en estudio determinando que estos son diferentes en composicion genetica segun la fuente de procedencia del aislamiento, permitiendo establecer estrecha correlacion entre el potencial bioinsecticida de las cepas de B. thuringiensis y su fuente de aislamiento. Mediante el estudio hecho con PCR en cepas que se separaron a partir de un aislamiento con variabilidad fenotipica al interior de la colonia, se logro establecer que existen diferencias en la composicion genetica de genes cry al interior de una misma colonia segun se observa por variabilidad morfologica de la misma. Esto conllevo a la propuesta de una hipotesis de trabajo bajo el concepto ecologico de poblacion de individuos de una misma especie, referida por una parte a una posible distribucion de funciones al interior de una colonia de B. thuringiensis manifestada por la presencia de individuos que se pueden diferenciar morfologica y geneticamente en algun estadio de su crecimiento cuya interaccion podria estar gobernada por principios de organizacion jerarquica.