Stratégies de reproduction et cycle de transmission : le modèle Leishmania

Les objectifs de ce travail sont d’une part d’etudier la structure des populations et le mode de reproduction des leishmanies et d’autre part d’etudier l’impact des activites humaines sur les foyers de leishmaniose en Guyane francaise. Ce dernier point est realise dans le cadre d’un projet ANR intitule : Impact de l’Anthropisation et de l’Environnement dans le fonctionnement des foyers de leishmaniose en Guyane Francaise, au Senegal et en France. Mon travail de these a pour buts specifiques : 1) de mener une etude de genetique des populations avec des marqueurs microsatellites sur differentes especes de leishmanies, collectees dans differentes localites 2) d’etudier les foyers de leishmaniose en Guyane Francaise et en particulier dans la localite de Cacao. Cette partie consiste (i) a caracteriser et a determiner la distribution des especes reservoirs mammiferes et de vecteurs potentiels de leishmaniose, (ii) a etudier la structure des populations des Leishmania isolees sur tout le territoire guyanais. Les analyses de genetique des populations sont menees afin de mieux comprendre la structure genetique et le mode de reproduction de ces protozoaires parasites. Pour acceder a une comprehension plus generale et globale du mode de transmission et de reproduction de ces parasites, des analyses sur 3 especes differents de leishmanies (L. Braziliensis, L. Guyanensis et L. Donovani), issues de localites differentes (Perou/Bolivie, Guyane francaise et Soudan), sont menees. Concernant l’etude sur Cacao (Guyane Francaise), differents sites de capture ont ete choisis en collaboration avec Francois Catzeflis representant des environnements differents et plus ou moins anthropises : les cultures actives, la foret « secondaire » et la foret « primaire ». A partir des captures de mammiferes realisees dans les differents sites choisis, des PCR diagnostiques ont ete effectuees sur les organes preleves (rate, oreille, foie et sang) afin de determiner les especes de mammiferes « reservoirs » potentiels a Cacao (Guyane Francaise). L’espece de leishmanie est ensuite determinee par sequencage. Les phlebotomes ont ete captures dans les memes sites selectionnes. Apres caracterisation morphologique, des PCR diagnostiques suivies du sequencage sont effectues sur les individus femelles pour determiner l’espece de Leishmania eventuellement presente. La distribution des especes de phlebotomes et des individus infectes sera etudiee en fonction du degre d’anthropisation. Les resultats obtenus pour la partie « parasites » revelent des donnees en contradiction avec un mode de reproduction theoriquement clonal. En particulier, les resultats suggerent pour la premiere fois un fort taux d’autofecondation. Ainsi, nous emettons l’hypothese que ces parasites sont capables d’alterner differents modes de reproduction (clonalite, autofecondation et evenements de recombinaison occasionnels). De plus, nous observons des structures de populations differentes en fonction des especes. On peut donc emettre l’hypothese que les parasites seraient capables d’alterner differents modes de reproduction dans des proportions differentes en fonction de l’espece de leishmanie consideree. Toutefois, differentes hypotheses restent encore a tester, telles que l’existence d’un effet Wahlund, de phenomenes de conversion genique, ou encore la possibilite que certains locus microsatellites situes a cote de genes subissent de la selection, etc. Pour la partie « reservoirs mammiferes », 58 individus ont ete captures par Francois Catzeflis pour lesquels la rate, l’oreille, le foie et le sang ont ete preleves. Tous ces echantillons ont ensuite ete analyses en PCR diagnostique, afin de determiner les individus parasites. Les resultats ont revele 9 individus positifs, principalement des mammiferes terrestres et pour la premiere fois en Guyane un chat et une chauve-souris. Nous avons determine par sequencage que le chat etait infecte par l’espece L. Braziliensis. Les 8 autres individus sont infectes par une Leishmania du sous-genre Viannia (PCR diagnostique). Il reste a determiner le taxon par sequencage. Pour les vecteurs, au total 3326 phlebotomes ont ete captures par Jean-Charles Gantier et l’equipe de Romain Girod, et aujourd’hui environ 1000 individus ont ete disseques et sont en cours d’identification morphologique. Il restera ensuite a effectuer des PCR diagnostiques sur les femelles afin d’evaluer les especes potentiellement vectrices de leishmaniose. De plus, pour cette partie, face au nombre trop important de vecteurs captures et donc a la masse de travail exorbitante de caracterisation des especes de phlebotomes, une technique de « barcoding » est en cours de mise au point pour l’identification des phlebotomes de Guyane Francaise en collaboration avec Jean-Yves Rasplus du CBGP.