猪IL－4、IL－6和IL－10SYBR Green I real—time PCR检测方法的建立及应用

为探讨PRRSV感染后机体的体液免疫应答、从分子水平深入研究PRRSV的免疫机制，本研究针对Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10以及看家基因8-actin的基因序列分别设计一对特异性引物，构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品，建立了检测IL-4、IL-6、IL-10及B—actin的SYBR Green Ireal-timePCR方法。该方法线性关系好，各种细胞因子及8-actin标准曲线的相关系数均达到0．997以上；敏感性高，初始模板的检出下限均达到1×10^1copies／μL；特异性强，扩增产物形成单一的特异性熔解峰；重复性好，组内与组间的变异系数均小于3％。应用所建立的方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染仔猪外周血单个核细胞（PBMC）中IL-4、IL-6和IL-10mRNA的表达水平进行了检测。结果表明，本研究建立的real-timePCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可以用于猪Th2型细胞因子的检测及定量分析。