稳定转染pEGFP-4.1N乳癌细胞系的筛选与鉴定

目的：建立真核表达载体pEGFP-4.1N稳定转染的乳癌MDA-MB-231细胞系,观察4.1N在MDA-MB-231细胞中的表达和定位。方法：真核表达载体pEGFP-4.1N转化到大肠杆菌中进行扩增,酶切鉴定插入片段后进行测序。脂质体法将重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,经G418筛选抗性克隆,利用倒置荧光显微镜观察融合蛋白在细胞中的定位,并用Western blot检测融合蛋白的表达。结果：真核表达载体pEGFP-4.1N的酶切片段经琼脂糖电泳和测序鉴定结果正确。G418筛选14d后获得pEGFP-4.1N稳定转染的MDA-MB-231抗性克隆。荧光显微镜下观察到融合蛋白在MDA-MB-231阳性克隆的细胞质中表达,核内不表达。Western blot亦检测到4.1N融合蛋白的表达。结论：成功建立了pEGFP-4.1N稳定转染的乳癌细胞系MDA-MB-231阳性克隆。