Evaluation of candidate factors for the post-transcriptional regulation of microRNA expression

RNA Silencing ist ein kurzlich entdeckter, naturlich vorkommender Mechanismus zur Regulation von Genexpression in zahlreichen Organismen. Die Schlusselfunktion des RNA Silencing wird von kleinen RNA-Molekulen namens microRNAs (miRNAs) getragen, die als post-transkriptionelle Regulatoren auf mRNAs einwirken, um Translationsinhibition oder Degradierung zu induzieren. Die Entstehung von miRNAs wurde in der Vergangenheit intensiv erforscht, weshalb zahlreiche beteiligte Proteinfaktoren bereits identifiziert werden konnten. Die Regulation der miRNA-Biogenese ist allerdings noch ein Forschungsfeld mit vielen offenen Fragen. Jungste Untersuchungen zeigen, dass die Vorstufe von miR-138 in Mausgeweben differentiell exprimiert wird, wahrend die reife miRNA lediglich in Nervengewebe exprimiert wird. Es konnte auch gezeigt werden, dass diese Beobachtung auf einen unbekannten Proteinfaktor zuruckzufuhren ist, der die Prozessierung von der Vorstufe zur reifen Form blockiert. Einige Kandidaten konnten durch chromatographische Methoden identifiziert werden, wobei das Heterodimer SRP9/14 am vielversprechendsten war. In der vorliegenden Studie wurde SRP9/14 als potentieller Inhibitor fur die miRNA-Biogenese mittels zweier Methoden evaluiert: einerseits wurde das Heterodimer als rekombinantes Protein exprimiert und auf seine Funktionalitat als Inhibitor von miR-138 in in vitro Assays getestet. Andererseits wurde die Expression von SRP9/14 in HeLa-Zellen durch siRNAs abgeschaltet und die Zellextrakte funktionell auf Vorhandensein des Inhibitors getestet. Beide Methoden zeigten, dass es sich bei SRP9/14 nicht um den gesuchten Inhibitor handelt.