银鲳( Pampus argenteus )胰岛素样生长因子-I基因的克隆和表达分析

胰岛素样生长因子-I（Insulin-like growth factor-I，IGF-I）是影响脊椎动物生长、发育及代谢的重要调控因子。本研究采用RT-PCR和RACE技术，克隆了银鲳（ Pampus argenteus ）肝脏IGF-IcDNA序列，应用半定量RT-PCR、Real-time qPCR和原位杂交的方法检测了IGF-I的组织表达特性、在肝脏中的生长表达特性和IGF-I基因在肝脏中的定位。序列分析表明，IGF-I cDNA序列全长836bp，其5'非编码区128bp、3'非编码区92bp，开放阅读框（open reading frame，ORF）605bp，由此推导IGF-I前体蛋白由201个氨基酸组成；前体肽由信号肽、成熟肽、E肽三部分组成，其中信号肽59个氨基酸，成熟肽68个氨基酸，E肽74个氨基酸；成熟肽由B、C、A、D四个区域组成，E肽分析表明，银鲳IGF-I属Ea-4型。同源性比较结果表明，银鲳与同目鲈形目鱼类的IGF-I编码序列同源性较高，为83.52%-91.40%；与哺乳类、鸟类和爬行类的同源性较低。半定量RT-PCR和Real-time qPCR组织特异性表达结果显示，IGF-I mRNA在肝脏组织中的表达量最高，显著高于其它组织，肾脏、心脏、肌肉、脑、鳃、小肠、卵巢次之，嗅球、脾脏和胃中表达较低；半定量RT-PCR和Real-time qPCR不同生长阶段表达结果显示，IGF-I mRNA在30-50 g肝脏组织中表达量最高（ P < 0.05）；IGF-I mRNA在肝脏中的原位杂交定位结果显示，在肝脏细胞中均有表达，阳性信号主要位于细胞质中，靠近细胞边缘处信号较强。