Expressão heteróloga e caracterização funcional da proteína Atx1 em Paracoccidioides spp

A paracoccidioidomicose (PCM) e uma importante micose da America Latina, causada por fungos termodimorficos do genero Paracoccidioides. A homeostase de metais como cobre, zinco e ferro e importante para a sobrevivencia dos fungos no ambiente do hospedeiro. Nesse contexto, o cobre e um importante cofator para varias enzimas, como as superoxido dismutases e a citocromo c oxidase. O excesso de cobre livre na celula promove o acumulo de especies reativas de oxigenio, causando danos a acidos nucleicos, lipideos e proteinas. Assim, os organismos devem manter concentracoes citoplasmaticas desses micronutrientes em niveis nao toxicos, apenas suficiente para o crescimento celular e processos metabolicos vitais. O metabolismo desse metal e rigorosamente controlado por sistemas de captacao de alta e baixa afinidade. O objetivo do trabalho e realizar a expressao heterologa da proteina Atx1, descrita na literatura como uma chaperona citosolica de cobre e analisar a sua localizacao celular, bem como o comportamento diante da privacao de cobre em Paracoccidioides spp. A expressao heterologa foi realizada em celulas eletrocompetentes de Escherichia coli, cepa BL21. A identidade da proteina recombinante foi confirmada por LC-MS/MS. Camundongos BALB/c foram imunizados para obtencao de anticorpos policlonais anti-Atx1. Apos realizacao de imunoblotting, os anticorpos produzidos foram utilizados para ensaios de imunofluorescencia em celulas leveduriformes. Analise por qRT-PCR nos permitiram avaliar os niveis do transcrito codificante da proteina Atx1 durante a privacao de cobre em Paracoccidioides spp.