Nitrogen nutrition in young rabbits: effect on intestinal health and growth performance

El objetivo global de esta tesis ha sido estudiar el efecto que la nutricion nitrogenada puede ejercer sobre la salud intestinal y los parametros productivos en gazapos destetados a 25 dias de edad. Para alcanzar este objetivo, se disenaron dos experimentos. El objetivo del primer experimento fue estudiar el efecto del nivel y fuente de proteina sobre la microbiota intestinal, parametros digestivos y rendimientos productivos en gazapos recien destetados. En este experimento, tambien se estudio el efecto de una suplementacion con antibioticos en el agua de bebida sobre la composicion de la microbiota intestinal y la incidencia de patologias digestivas. Para ello se formularon cuatro dietas isoenergeticas e isofibrosas: una dieta control con un alto contenido en proteina (207 g/kg MS) y en heno de alfalfa (HPHL), una dieta con un bajo nivel de proteina (179 g/kg MS) y alto contenido en heno de alfalfa (LPHL), y otras dos dietas con bajo nivel de proteina en las cuales se sustituyo el heno de alfalfa parcialmente (LPML) o totalmente (LPLL) por concentrado de proteina de soja. Los conejos se destetaron a 25 dias, y fueron alimentados con las dietas experimentales durante las dos primeras semanas, y a partir de esta consumieron una dieta comercial hasta que alcanzaron los 56 dias de edad. Para estudiar la tasa de mortalidad, ademas de estos animales se utilizaron otros 70 conejos por dieta que no recibieron medicacion en el agua de bebida. El perfil de la microbiota intestinal se estudio a los 35 dias de edad, tanto en conejos que habian recibido antibiotico (18 por dieta) o como en aquellos que no habian sido medicados (12 por dieta). Como se esperaba, la suplementacion con antibioticos en agua de bebida redujo tanto la mortalidad durante el periodo de cebo, como la biodiversidad de la microbiota intestinal. La reduccion del nivel de proteina en la dieta tambien condujo a una menor mortalidad (P < 0.05), que se observo tanto en los animales que no habian sido medicados (una reduccion del 80%) como en los que habian sido medicados (una reduccion del 39%) en el agua de bebida. Ademas, los animales no medicados mostraron una menor frecuencia de deteccion (P < 0.05) de Clostridium perfringens. El nivel de proteina en la dieta no afecto a la morfologia intestinal, ni a los parametros productivos durante el periodo global de cebo. Sin embargo, los animales que consumieron las dietas con alto contenido en proteina (dietas HPHL) mostraron una eficacia alimenticia superior (4.8%, P < 0.01) a aquellos que consumieron las dietas con bajo contenido en proteina (LPHL). La sustitucion del heno de alfalfa por un concentrado de proteina de soja en las dietas con bajo nivel de proteina, no afecto ni a la digestibilidad ileal ni a la fecal aparente de la materia seca y proteina. Sin embargo, se observo una reduccion de la digestibilidad ileal de la cistina, alanina, acido aspartico y prolina (P < 0.05) con la sustitucion creciente de concentrado de proteina de soja. Sin embargo, no se observo efecto sobre el flujo ileal de proteina, la mortalidad ni sobre la presencia de Clostridium perfringens. Nuestros resultados sugieren que una reduccion del nivel de proteina en la dieta, reduce el flujo ileal de nitrogeno, y puede ser beneficioso para el gazapo ya que limita el numero de bacterias potencialmente patogenas a lo largo del intestino. Por lo tanto, la reduccion del nivel de proteina en la dieta deberia ser contemplada como una estrategia alimenticia para mejorar la salud intestinal en conejos. El objetivo del segundo experimento fue estudiar el efecto de una suplementacion con 1% de L-glutamina y 0.5% de L-arginina sobre la salud intestinal en conejos destetados. Para ello, se formulo una dieta basal para cubrir las necesidades de acuerdo con las recomendaciones actuales para gazapos destetados a 25 dias. A partir de esta se formularon dos dietas experimentales con la misma composicion que la basal, a las que se anadio por dilucion 1% de L-Glutamina (Gln), y una mezcla de 1% L-Glutamine + 0.5% L-Arginina (Gln-Arg). Los conejos se destetaron a 25 dias y fueron sacrificados a los 35 dias para determinar la digestibilidad ileal aparente (DIA) de la material seca (MS), proteina bruta (PB) y aminoacidos (AA), la morfologia intestinal, la actividad intestinal de N-aminopeptidasa y mieloperoxidasa (MPO), abundancia relativa de PPAR -mRNA en el ileon y rinon, inmunoglobulina G (IgG) en suero, y composicion de la microbiota ileal y cecal por PCR-RFLP. La mortalidad y los rendimientos productivos se determinaron en conejos que fueron alimentados con las dietas experimentales durante las dos primeras semanas, y a partir de esta consumieron una dieta comercial hasta que alcanzaron los 56 dias de edad. La dieta no afecto ni a la ganancia ni al consumo medio diario, ni tampoco a la eficacia alimenticia durante el periodo global de cebo (46.6 g/d, 110 g/d y 0.428 g/g respectivamente). La suplementacion con Gln en la dieta aumento la DIA del acido glutamico (4.4%, P = 0.004), redujo la de la prolina (5.4%, P < 0.001), y no afecto a la DIA de la materia seca, de la proteina, ni a la del resto de aminoacidos. La suplementacion adicional de Arg no afecto a la DIA de ningun nutriente. Tanto la adicion de glutamina como la suplementacion adicional de arginina no afectaron a la relacion altura de villi/profundidad de cripta de las vellosidades intestinales, ni a la actividad enzimatica intestinal N-aminopeptidasa. Tampoco se observaron efectos sobre la actividad MPO, la abundancia relativa de PPAR -mRNA, ni sobre la IgG del suero. La suplementacion con glutamina redujo la mortalidad en cebo durante las dos primeras semanas (54.6 %, P = 0.023) y durante el periodo global (P = 0.039), mientras que no se observo efecto de la adicion suplementaria de arginina. Los dendrogramas agruparon los animales por dietas; la suplementacion con glutamina promovio los mayores cambios en la microbiota intestinal tanto en el ileon como en el ciego, y redujo la frecuencia de deteccion de Clostridium spp. (de 86.7 a 33.3%, P = 0.003) en el ileon y la de Helicobacter spp. en el ileon (de 86.7 a 46.7%, P = 0.003) y en el ciego (de 86.7 a 46.7, P = 0.028) mientras que no se observo efecto con la adicion de arginina. En conclusion, la suplementacion con 1% L-Glutamina en las dietas de conejos post-destete redujo la mortalidad, modifico la microbiota intestinal, pero no afecto positivamente ni a la integridad de la mucosa intestinal, a la respuesta inflamatoria ni a la respuesta inmune humoral. La adicion suplementaria de 0.5% L-Arginina no mejoro los efectos positivos observados con la sola suplementacion de glutamina.