Procédé pour produire un complexe cas9-arng, procédé pour introduire un complexe cas9-arng dans un noyau cellulaire, et procédé pour modifier un gène cible dans une cellule

La presente invention concerne un procede destine a produire un complexe Cas9-ARNg qui comporte une etape consistant a melanger Cas9 et un ARNg a une temperature superieure ou egale a 20 °C pour former un complexe Cas9-ARNg, l'ARNg comprenant un polynucleotide qui comprend une sequence de bases complementaire a une sequence de bases de 1 base en amont a de 20 a 24 bases en amont de la sequence PAM dans le gene cible. Ce procede d'introduction d'un complexe Cas9-ARNg dans un noyau cellulaire comprend : une etape consistant a amener une toxine streptolysine O sensibles aux enzymes streptococciques a agir sur la membrane plasmatique d'une cellule pour former des pores dans au moins une partie de la membrane plasmique ; une etape consistant a introduire un complexe Cas9-ARNg, obtenu au moyen du procede ci-dessus pour produire un complexe Cas9-ARNg, dans la cellule dans laquelle ont ete formes des pores dans au moins une partie de la membrane plasmique ; et une etape consistant a ajouter une solution comprenant des ions calcium a la cellule dans laquelle sont formes des pores dans au moins une partie de la membrane plasmique et dans laquelle le complexe Cas9-ARNg a ete introduit, et refermer les pores formes dans au moins une partie de la membrane plasmique.