Enzymatische Synthese von Nukleinsäuren mit definierten regioisomeren 2′-5′-Verknüpfungen

Informationentragende Nukleinsauren sind universell uber 3′-5′-Bindungen verknupft. Regioisomere 2′-5′-Verknupfungen bilden sich dagegen unregelmasig wahrend der nichtenzymatischen RNA-Synthese und waren womoglich hilfreich fur die prabiotische RNA-Replikation. Hier berichten wir uber die enzymatische Synthese von DNA und RNA mit ortsspezifischen 2′-5′-Verknupfungen durch ein gezielt verandertes Polymerase-Enzym, das 3′-Desoxy- oder 3′-O-Methyl-NTPs als Substrat verwendet. Zusatzlich vermelden wir die reverse Transkription der so hergestellten, modifizierten Nukleinsauren zuruck in 3′-5′-verknupfte DNA mit guter Fidelitat. Somit ergibt sich eine schnelle und einfache Methode zur “strukturellen Mutagenese” durch positionsselektives Einfugen von 2′-5′-Verknupfungen, durch die, ohne Anderung der Basensequenz, die Struktur und Funktion von Nukleinsauren anhand lokaler Deformationen durch regioisomere Bindungen untersucht werden kann. Beispielhaft wenden wir diese Methode auf das 10-23-RNA-Endonuklease-DNAzym an.