细粒棘球蚴重组St-Eg.ferritin疫苗构建与免疫性分析

目的探讨以减毒沙门菌为载体,构建表达细粒棘球蚴Eg.ferriti蛋白口服活载体疫苗的可行性。方法从细粒棘球蚴包囊中分离原头节,超声粉碎后提取总RNA,通过RT-PCR扩增细粒棘球蚴Eg.ferritin基因,然后将Eg.ferritin基因插入到pYA3341表达载体中,构建重组质粒pYA3341-Eg.ferritin,将重组质粒依次电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、安全性以及免疫原性进行评价。结果经酶切鉴定成功构建了重组质粒pYA3341-Eg.ferritin,Western blot结果证实Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得了表达;重组菌株在体外至少传代10次而保证重组质粒不丢失;小鼠免疫试验证实,重组菌安全无毒性;重组菌口服免疫小鼠可检测到Eg.ferritin特异性IgG抗体。结论本试验成功构建了能稳定表达细粒棘球蚴Eg.ferritin蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,并显示了良好的免疫原性和安全性,为包虫病新型口服基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。