Evaluación del cultivo fecal de pools y de la qPCR en muestras individuales y su aplicación en el diagnóstico de la paratuberculosis en vacuno de leche

Los objetivos principales de este trabajo fueron establecer un plan de control de la paratuberculosis de tres anos de duracion basado en el cultivo fecal de pools de todos los animales mayores de dos anos presentes en las explotaciones incluidas, asi como comparar la clasificacion sanitaria obtenida mediante este metodo con respecto a los resultados serologicos obtenidos el primer ano de estudio. Tambien se comparo la utilidad del cultivo fecal de pools con el cultivo fecal individual para la monitorizacion del estatus sanitario de los rebanos, y se estudiaron dos frecuencias de muestreo para la realizacion de los cultivos fecales de pools (semestral/anual). Otro de los objetivos planteados fue la posible aplicacion de este metodo para evaluar la reduccion de la prevalencia individual tras la implantacion en granja de medidas de bioseguridad y manejo higienico. Por ultimo, tambien se comparo la validez de una tecnica de qPCR basada en la diana F57 en relacion a los resultados obtenidos mediante cultivo fecal individual. La parte experimental de este trabajo se dividio en tres estudios, que se realizaron entre los anos 2009-2012 en 36 rebanos de vacuno lechero de la provincia de Lugo. Los resultados del primer estudio muestran una escasa concordancia entre los resultados de serologia y cultivo fecal de pools para la clasificacion sanitaria de las granjas, fundamentalmente debido a granjas seropositivas pero con cultivo negativo. Al estratificar los resultados en funcion de la edad de los animales, se pudo observar que el mayor grado de concordancia se producia en el grupo de edad de 2 anos, disminuyendo progresivamente a medida que aumentaba la edad de los animales. Este hecho hace sospechar de un problema de especificidad de las tecnicas serologicas ya que, a medida que aumenta la edad de los animales, aumenta la probabilidad de contacto con otras micobacterias y por tanto la probabilidad de obtener falsos resultados positivos. El segundo estudio permitio observar que el porcentaje de explotaciones positivas detectadas mediante cultivo fecal de pools aumentaba a cada ano de muestreo, poniendo de manifiesto la utilidad de este sistema para la monitorizacion de los rebanos y la necesidad de que se realice de manera continuada. Mediante el calculo de la prevalencia individual a partir de los resultados de los cultivos de pools fecales se comprobo que este metodo es una herramienta valida para evaluar la prevalencia individual y, por tanto, la efectividad de los protocolos de bioseguridad y manejo implantados. En cuanto a la comparacion con el cultivo fecal individual y el aumento de la frecuencia de analisis, ninguna de estas variaciones mejoro los resultados obtenidos mediante cultivo fecal de pools para la clasificacion sanitaria de las explotaciones. Ademas, se identificaron diferentes factores de riesgo mediante la clasificacion obtenida en el ultimo ano, lo que ilustra tambien la necesidad de que los estudios de factores de riesgo se realicen en granjas que presenten un control de la enfermedad como minimo de tres anos. Los resultados del tercer estudio muestran que la tecnica de qPCR basada en la diana F57 es adecuada para sustituir al cultivo microbiologico individual, reduciendo en gran medida el tiempo de diagnostico, y sugiriendo ademas que esta tecnica de PCR podria detectar la eliminacion fecal mas precozmente que las tecnicas microbiologicas convencionales en aquellos casos en los que la eliminacion fecal es muy baja.