Expression from cardiomyocyte-specific promoter after adenovirus-mediated gene transfer in vitro and in vivo

Resume Les adenovirus sont des vecteurs attractifs pour le transfert de genes dans le muscle cardiaque. Cependant, le large tropisme du virus pour les autres tissus de l'organisme permet une expression ectopique du transgene, et constitue donc une limitation majeure a son utilisation. Dans le but de restreindre l'expression d'un gene rapporteur dans des cardiomyocytes en culture et dans le cœur chez le rat, nous avons construit un adenovirus recombinant (Ad-MLC2βgal) contenant le gene de la β-galactosidase sous le controle du promoteur de l'isoforme 2 de la chaine legere de la myosine ventriculaire (MLC-2v) du rat. Nous montrons dans ce travail que le promoteur MLC-2v, dans l'environnement du genome viral, conserve sa specificite d'origine aussi bien in vitro dans des cardiomyocytes d'origine ventriculaire que dans le cœur chez l'animal. L'etude des ARNm apres infection par le virus Ad-MLC2βgal montre que la transcription n'est veritablement significative que dans des cellules derivant du muscle cardiaque et non du muscle squelettique. L'etude quantitative de l'activite de la β-galactosidase dans plusieurs autres lignees cellulaires confirme ce resultat. Le niveau d'expression de la β-galactosidase dans des cardiomyocytes primaires de rat infectes par Ad-MLC2βgal correspond a 8 % de celui trouve dans des cardiomyocytes infectes par le virus Ad-RSVβgal (gene de la β-galactosidase sous le controle du promoteur du virus de sarcome de Rous). L'expression specifique dans les cardiomyocytes est egalement conservee apres injection du virus Ad-MLC2βgal en intraparietal dans le myocarde du rat, bien que le genome viral soit aussi detecte par PCR dans d'autres tissus. L'absence d'expression apres injection directe dans le foie et le muscle squelettique confirme ces resultats. L'utilisation d'un promoteur tissu-specifique est une premiere etape pour restreindre l'expression d'un gene therapeutique porte par un vecteur viral a un type cellulaire particulier du tissu cible.