Une nouvelle méthode de génotypage plaquettaire étendu aux systèmes HPA-1 à −11 et −15 par PCR en temps

L’allo-immunisation fœto-maternelle plaquettaire anti-HPA-1a est la plus frequente dans la population caucasienne. Cependant, les antigenes plaquettaires rares ne sont pas restreints a des familles isolees. Ainsi, nous avons identifie des thrombopenies fœtales et neonatales severes impliquant HPA-12bw (Bertrand et al., Transfusion 2007) et HPA-13bw (Bertrand et al., Transfusion 2013). Nous presentons ici une nouvelle methode commerciale de genotypage HPA etendu marquee CE-IVD basee sur la technologie LinkSeq de PCR en temps reel, distribuee par la societe Linkage BioSciences. Le kit propose contient le mix PCR, la Taq polymerase et les plaques PCR contenant les amorces. Le processus prePCR consiste uniquement a diluer l’ADN a la bonne concentration, puis a ajouter le mix PCR et distribuer sur la plaque. Apres amplification et etablissement de la courbe de fusion par l’appareil de PCR en temps reel, le logiciel SureTyper interprete automatiquement les fluorescences. L’ensemble du processus permet de genotyper 2 echantillons en 1 h30 environ (par exemple, une mere et son enfant severement thrombopenique). La robustesse de cette technologie a ete evaluee en testant des ADNs rares (HPA-2ab, −4ab, −6abw, −9abw) ou presentant des mutations silencieuses situees a proximite de polymorphismes HPA. Tous les ADNs ont donne des resultats de typage concordants avec le resultat attendu, demontrant que les amorces PCR ont ete correctement concues et n’interferent pas avec la presence de polymorphismes particuliers. Par ailleurs, la technologie LinkSeq permet de genotyper correctement les systemes HPA rares.