链霉菌M-Z18膜蛋白ε-聚赖氨酸降解酶的分离纯化、酶学性质及应用

【目的】研究链霉菌Streptomyces sp.M-Z18e-聚赖氨酸降解酶（Pld）的分离纯化及其生理生化特性,并利用该酶制备低聚合度e-聚赖氨酸（e-PL）。【方法】菌体细胞经超声破碎、NaSCN溶解和HiTrapTMButyl HP疏水层析制备到Pld,随后研究了其酶学性质、动力学和降解e-PL过程,最后利用常量稀释法比较了不同聚合度范围e-PL的最小抑菌浓度。【结果】从Streptomyces sp.M-Z18细胞膜上分离纯化到Pld,纯化倍数为80.4倍,回收率达到59.3%。以L-赖氨酰对硝基苯胺为底物,酶促反应的最适温度为37℃,最适pH为7.0,动力学常数Km为0.621 mmol/L,Vmax为701.16 nmol/min·mg;酶活在pH 7.0-10.0和50℃以下稳定。降解e-PL实验发现,纯化到的Pld以内切方式降解e-PL。抑菌实验表明,高聚合度e-PL（30-35）对细菌的抑制效果较好,而低聚合度e-PL（8-20）更有利于抑制酵母菌的生长,各种聚合度e-PL对霉菌的生长抑制均较差。【结论】从e-PL产生菌中分离纯化到内切型e-PL降解酶,发现不同聚合度范围e-PL对微生物的抑制能力存在显著差异。