Validation steps for the detection of L858R mutation in EGFR gene by real time quantitative PCR.

Depuis le 16 janvier 2010, la legislation relative a la biologie medicale impose la mise en place de l’accreditation selon la norme ISO 15189 pour tous les examens de biologie medicale, y compris pour les examens de biologie moleculaire. Ce travail s’inscrit dans cette demarche et vise a valider la recherche par PCR en temps reel de la mutation L858R du gene EGFR parfois retrouvee dans les cancers bronchiques non a petites cellules (CBNPC). Chez les patients atteints de CBNPC, la recherche de cette mutation permet d’orienter la therapeutique dans la mesure ou sa presence est associee a une meilleure sensibilite aux inhibiteurs de tyrosine kinase. En vue de l’accreditation de cet examen, nous avons suivi les recommandations dictees par le Cofrac (Comite francais d’accreditation) et par l’INCa (Institut national du cancer). Ainsi, differents parametres ont ete valides : la verification des amorces, la limite de detection, la sensibilite et la specificite diagnostique, la repetabilite, la reproductibilite intra-laboratoire, la robustesse, la contamination inter-echantillons, la stabilite des reactifs et la comparaison de cette methode a la methode de reference (methode de Sanger). Enfin, une etude des risques a mis en evidence certaines defaillances pour lesquelles des actions correctives seront mises en place. Un dossier de validation de methode SH Form 44 sera complete avec ces resultats en vue de l’obtention de l’accreditation. Bien que longue et fastidieuse, la validation de methode assure un examen realise dans des conditions optimales et vise a garantir la qualite des resultats rendus.