鸡γ-干扰素成熟肽基因的克隆、表达与抗血清制备

为了制备安全、高效的重组鸡γ-干扰素及抗血清,以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡γ-干扰素的成熟肽基因序列,并构建原核表达质粒pET32a-γ和pGEX6p-γ;SDS-PAGE法检测2个载体特异性表达成熟肽的情况;将纯化的pET32a-γ诱导表达产物免疫小鼠,收获小鼠血清,并以pGEX6p-γ诱导表达产物检测其中特异性抗体滴度。结果显示,扩增的鸡γ-干扰素成熟肽基因能成功表达,原核表达产物免疫小鼠可产生特异性抗体,抗体效价为1∶16 000。表明所用的表达系统可以制备安全、高效的重组干扰素,能够为定量检测机体内产生的γ-干扰素进而了解机体针对病原的免疫状态提供较为可靠的技术手段,为其他一些尚无商品化抗体的生物分子鉴定提供参考方法。