P2121 Altérations des étapes distales de l’exocytose d’insuline en conditions glucotoxiques : étude par microscopie TIRF

Introduction L'hyperglycemie chronique observee dans les pathologies diabetiques exerce des effets deleteres sur la fonction des cellules β en perturbant, entre autres, l'expression et l'interaction des partenaires des etapes distales de l'exocytose. Recemment, la microscopie par TIRF (Total Internal Reflexion Fluorescence) a permis de visualiser les phenomenes d'exocytose sur cellules β vivantes. Le but de ce travail est d'utiliser cette technique pour etudier le comportement des granules d'insuline et celui du cytosquelette sous-cortical d'actine en reponse au glucose dans une cellule β normale afin, par la suite, de mieux comprendre les modifications et defauts subis lorsqu'une cellule β se retrouve en conditions glucotoxiques. Materiels et methodes Des cellules β de la lignee INS-1 832/13, cultivees en conditions normales ou glucotoxiques, sont transfectees avec un plasmide NPY-EGFP (marquage des granules d'insulines) ou avec un plasmide codant pour un peptide LifeAct-RFP (Ibidi) (marquage specifique des filaments d'actine). Ces cellules sont stimulees par du glucose (16,7mm) puis visualisees en temps reel par microscopie TIRF. Resultats En conditions normales, une stimulation aigue des cellules INS-1 832/13 par le glucose entraine une augmentation du nombre d'evenements de fusion correlee a une diminution du nombre total de granules d'insuline accoles a la membrane et une reorganisation du cytosquelette d'actine. Lorsque ces cellules sont cultivees en conditions glucotoxiques, elles presentent : 1/ une densification de ce reseau d'actine a l'etat basal ; 2/ un defaut de reorganisation du reseau sous-cortical d'actine en reponse au glucose et 3/ une diminution du nombre total de granules proche de la membrane. L'ensemble de ces alterations est accompagne d'une diminution de la fonction insulino-secretoire en reponse au glucose. Conclusion En conditions glucotoxiques, une perturbation de la dynamique du reseau sous cortical d'actine dans la cellule β pancreatique pourrait participer au deficit insulino-secretoire de ces cellules, notamment en modifiant le debit d'exocytose des granules d'insuline.