MMP-9单克隆抗体超微超顺磁性氧化铁粒子的合成并行ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化7.0 T MR成像的研究

目的：通过化学合成方法制作基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）单克隆抗体超微超顺磁性氧化铁（ultrasmall superparamagnetic iron oxide,USPIO）粒子MR分子探针,并探讨其作为MR特异性分子探针示踪剂使动脉粥样硬化成像的可行性。方法：采用EDC（1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride）化学连接剂将MMP-9单克隆抗体与DMSA[meso-2,3-dimercaptosuccinic acid,（HOOCCH（SH）-CH（SH）-COOH）]修饰的USPIO相结合,形成具有免疫学活性的MR分子探针。通过间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测其免疫活性及生物稳定性。采用高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠结合机械损伤的方法,建立小鼠左侧颈动脉粥样硬化模型。将MR磁性粒子探针（Ab-MMP-9-USPIO）经小鼠尾静脉注射（45 mgFe.kg-1）,分别于0、4、6、24、48 h对小鼠颈部行7.0 TMR扫描检查。结果：向0.05 mg的USPIO溶液中加入不同质量的单克隆抗体,ELISA试验所得的生成物MMP-9单克隆抗体超微超顺磁性纳米颗粒（Ab-MMP-9-USPIO）吸光度值随抗体含量增加而增大,与阴性对照USPIO组（未加单克隆抗体）相比较差异有统计学意义（P〈0.05）,分别间隔3 d及100 d后再次测量,100μg及200μg单抗组吸光度值降低（P〈0.05）。经小鼠尾静脉注射磁性粒子探针后6 h,损伤侧颈动脉斑块管壁信号于T2WI像上降低最显著,管腔呈＂假性扩大样＂改变。结论：EDC化学方法可制备出单克隆抗体USPIO粒子,同时仍具有抗体的免疫学活性及生物稳定性。该合成物可以作为MR分子探针在体显像小鼠颈动脉粥样硬化斑块,为动脉粥样硬化斑块的分子成像提供了实验依据。