NUCLEOTIDES MARQUES SUR LE PHOSPHATE DE TERMINAISON ET METHODES D'UTILISATION

La presente invention concerne des methodes de detection d'un acide nucleique dans un echantillon, basees sur l'utilisation de nucleotides marques sur le phosphate de terminaison en tant que substrats de polymerases d'acide nucleique. On utilise dans les methodes de l'invention un analogue de polyphosphate de nucleoside, de polyphosphate de dideoxynucleoside ou de polyphosphate de deoxynucleoside presentant un fragment colorimetrique, chimiluminescent ou fluorescent, un marqueur de masse ou un marqueur electrochimique rattaches au phosphate de terminaison. Lorsqu'une polymerase d'acide nucleique utilise cet analogue en tant que substrat, un marqueur activable par une enzyme est present sur le produit derive de polyphosphate inorganique du transfert de phosphoryle. Le clivage du produit de polyphosphate de transfert de phosphoryle via la phosphatase genere un changement pouvant etre detecte dans le marqueur rattache. L'invention concerne egalement une methode de surveillance en temps reel de la synthese d'ADN ou d'ARN et de detection d'un acide nucleique cible, utilisee lorsque l'analyse de la polymerase s'effectue en presence d'une phosphatase.