兔抗MDA-7/IL-24多克隆抗体的制备和特异性鉴定

目的：制备兔抗MDA-7/IL-24抗体,并鉴定其特异性.方法：从经PHA刺激培养的人外周血淋巴细胞中用RTPCR扩增mda-7/IL-24基因,构建带His6-tag的原核表达载体pET-28a（＋）-mda-7/IL-24,并在大肠杆菌中表达.将表达产物进行SDS-PAGE后,切下含有目的蛋白的胶条,免疫新西兰纯种大白兔,收集免疫兔血清,用Western blot检测抗血清与大肠杆菌表达的重组蛋白His6-MDA-7/IL-24和肺癌细胞A549中重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24表达产物的反应性.结果：经IPTG诱导表达的His6-MDA-7/IL-24融合蛋白的相对分子质量（Mr）约为28 000,主要为包涵体形式.Western blot证实,表达产物可与抗His6单克隆抗体（mAb）特异性结合.1：5 000的抗血清仍能结合His6-MDA-7/IL-24融合蛋白;稀释为1：1 000时,能与重组腺病毒Ad.mda-7/IL-24在A549细胞中的表达产物结合.结论：成功地制备兔抗MDA-7/IL-24抗体,该抗体能够识别体外过表达的MDA-7/IL-24蛋白.