Réactions chimiosélectives pour l'étude d'interactions biomoléculaires

Le travail effectue au cours de cette these se situe a l’interface de plusieurs domaines : la chimie, la biologie et la technologie des biopuces a peptides. Le coeur de ce projet est base sur la reactivite particuliere des peptides a-oxo aldehydes qui sont d’excellents partenaires dans les reactions chimioselectives de type hydrazone, semicarbazone ou oxime. Grâce a cela, le screening d’une partie de la proteine NS3 du virus de l’hepatite C, a permis de mettre en evidence des epitopes conformationnels peptidiques. Le premier chapitre constitue un prelude bibliographique sur les differents types de ligations chimiques et en particulier sur les ligations hydrazone et oxime. Les principes de la reconnaissance antigene-anticorps sont egalement presentes afin de mieux comprendre la problematique du criblage epitopique, ses contraintes et son application au cas de l’hepatite C. Ce travail utilise l’outil biopuce ; aussi un developpement succinct de cette technologie, tres centre sur notre application, est donne. Enfin, des bases de statistique sont rappelees. Dans le second chapitre, nous decrivons la mise au point et la validation d’une methode de dosage simple et rapide des fonctions a-oxo aldehydes via la formation d’une oxime. Dans le troisieme chapitre, nous avons demontre qu’il etait possible de recreer un epitope conformationnel peptidique reconnu specifiquement par des anticorps diriges contre la proteine NS3 du virus de l’hepatite C. Pour cela, la chimie de ligation a ete employee pour connecter chimiquement des peptides issus de differentes regions distantes dans la sequence primaire de la proteine NS3 et former le motif antigenique. Dans ce chapitre, nous decrivons egalement les modifications que nous avons du apporter a la technologie biopuce existante pour l’adapter a nos besoins specifiques. Une interface bio-informatique a egalement du etre developpee a la fois pour stocker, gerer et retraiter la masse de donnees generees par cette technologie. Enfin, dans le quatrieme chapitre, nous exploitons le potentiel chimioselectif de la chimie de ligation hydrazone dans une methodologie de purification par capture covalente de peptides sur phase solide.