中国美利奴羊（新疆型）皮肤组织GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立

【目的】建立GAPDH内参基因实时荧光定量PCR方法，为进一步研究中国美利奴羊（新疆型）相关基因的定量表达奠定基础。【方法】采用中国美利奴羊（新疆型）皮肤组织为试材，根据Genebank中绵羊GAPDH基因序列，设计并合成一对引物，建立基于SYBR GreenⅠ染料技术的Real—Time PCR检测体系，绘制出标准曲线并对其熔解曲线分析。【结果】以cDNA为模板建立的标准曲线循环阈值（Q）与标准cDNA模板在一定浓度范围内呈良好的线性关系，GAPDH基因标准曲线中模板拷贝数（X）与Ct值的关系为Q=-3．67951gX＋35．648，相关系数R=0．9998；试验重复性好，批内和批间变异系数（CV％）分别为0．22％-3．45％和1．30％～4．89％。【结论】所建立的方法具有快速、线性范围广、重复性强等特点，GAPDH可作为内参基因用于绵羊相关基因的定量表达研究。