小鼠Dishevelled 2表达质粒的构建及其在RAW264.7细胞中的表达

目的构建小鼠Dishevelled 2（Dvl2）表达质粒,并检测其转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7后的表达,为进一步研究Dvl2在破骨细胞分化和骨重建中的作用、筛选调节骨重建潜在靶点奠定基础。方法根据GenBank小鼠Dvl2 cDNA序列设计两条特异性引物,提取RAW264.7细胞总RNA,以RT-PCR获得Dvl2的开放阅读框（ORF）,并将其克隆到真核表达质粒pEZ-M29上,酶切电泳,测序鉴定构建的pEZ-M29/Dvl2质粒。用脂质体介导瞬时转染RAW264.7细胞,通过荧光显微镜观察转染效果,实时定量RT-PCR检测Dvl2基因表达情况。结果成功构建pEZ-M29/Dvl2表达载体,酶切电泳和测序结果与目的基因相符;转染RAW264.7细胞后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达;实时定量RT-PCR可见实验组Dvl2基因较对照组强烈过表达。结论成功构建小鼠Dvl2真核表达质粒pEZ-M29/Dvl2,瞬时转染小鼠破骨前体细胞RAW264.7可显著提高Dvl2的mRNA水平。