Recherche de marqueurs in vitro spécifiques de la récidive post-greffe de la hyalinose segmentaire et focale

Introduction La recidive de la hyalinose segmentaire et focale (HSF) sur le greffon concerne 30 a 50 % des patients, pouvant conduire a une impasse therapeutique et condamner les patients a une dialyse a vie. La recherche du facteur causal requiert la realisation de tests in vitro souvent bases sur l’evaluation de l’integrite du cytosquelette (phalloidine, synaptopodine) ou de l’expression des proteines du diaphragme de fente (nephrine, podocine). L’activation de deux voies de signalisation impliquees dans la regulation du cytosquelette a ete recemment mise en evidence dans des podocytes cultives en presence de plasma de patients de recidive de HSF (rHSF) : celle initiee par l’activation de la GTPase Rac-1 et celle de la vasodilator stimulated phosphoprotein (VASP). Patients/Materiels et methodes Notre objectif a ete d’identifier des marqueurs specifiques d’alteration podocytaire en reponse au plasma de patients rHSF. Pour cela nous avons incube des lignees de podocytes de souris et humains avec 10 % de plasma rHSF pendant 4 h ou 24 h, en utilisant comme controle le plasma d’un patient traite pour un rejet de greffe et beneficiant d’un traitement equivalent (immunosuppresseur plus echanges plasmatiques et a distance des bolus de solumedrol). Par microscopie de fluorescence, nous avons evalue l’etat du cytosquelette d’actine par marquage a la phalloidine, ainsi que l’expression de la nephrine. Par western blot, nous avons etudie l’etat de phosphorylation de PAK-1 (proteine effectrice de l’activation de Rac-1) et de VASP (Ser157 et Ser239). Observation/Resultats Nos resultats preliminaires montrent, par immunofluorescence, que le plasma rHSF induit une legere diminution de l’expression de la nephrine, ainsi qu’une rarefaction des fibres de stress apres 4 h d’incubation, avec un retrecissement du cytoplasme dans une proportion importante des cellules a 24 h. Ces modifications, bien que moindres, sont aussi observees apres incubation avec le plasma controle. Par western blot nous avons observe une augmentation de la phosphorylation de PAK-1 apres 4 h et une augmentation de sa forme totale apres 24 h d’incubation avec rHSF. La phosphorylation de VASP (Ser239) diminue a 24 h d’incubation avec rHSF, alors que l’abondance de sa forme totale ne varie pas. En presence de plasma controle, nous n’avons pas observe de modification sauf une legere augmentation de la phosphorylation de PAK-1 a 4 h. Discussion/Conclusion En conclusion, la dynamique d’expression et phosphorylation de PAK-1 et VASP pourrait etre ciblee dans l’evaluation in vitro de l’activite des facteurs de permeabilite glomerulaire. Ces resultats suggerent l’implication de ces deux voies dans les mecanismes de toxicite podocytaire associes a la rHSF.