短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX几丁质酶基因（chiD）的克隆与原核表达

以短短芽胞杆菌FJAT-0809-GLX基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到几丁质酶基因chiD序列,再将chiD序列连接到pMD18-T克隆载体上,形成重组载体pMD 18-T-chiD,转化大肠杆菌DH5α并测序,经过核苷酸和氨基酸序列分析获得几丁质酶基因chiD的序列片段为1524 bp,编码507个氨基酸,理论蛋白质分子量约54.55 ku,其等电点约为5.77,表明该几丁质酶为酸性几丁质酶.将重组质粒pMD 18-T-chiD双酶切后与表达载体pET-28a连接,构建重组表达载体pET28a-chiD,并转入大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,结果表明：重组蛋白质的分子量约55 ku,与预测的蛋白分子量结果一致.为了提高重组蛋白的表达量,对培养时间、IPTG浓度和温度3个参数进行优化,并将表达产物进行SDS-PAGE分析,最后得出重组载体pET28a-chiD的最佳诱导表达参数分别为8h、0.5 mmol/L和28℃.这为短短芽胞杆菌来源的几丁质酶的进一步研究奠定了良好基础.