형질전환체에서 도입유전자 구조와 메틸화가 유전자 발현에 미치는 영향

35S::hpt-35S::gus-mUbi1::bar 유전자로 형질전환된 벼에서 세대진전을 통한 유전자 구조 및 발현양상을 분석하였다. 1. 하이그로마이신 저항성을 나타낸 형질전환 벼(T0)에서 제초제 감수성을 나타낸 개체는 bar 유전자가 존재하지 않았거나 mUbi1 프로모터의 불완전한 삽입으로 인한 것을 알 수 있었다. GUS 발현은 도입 유전자의 copy 수에 따라 상당한 변이가 있었으며 3 copy 이상 도입된 형질전환체에서는 발현이 약하거나 silencing 현상이 일어났다. 2. 도입 유전자의 구조 및 상태를 알아보기 위하여 Hpa II와 Msp I 으로 genomic DNA를 절단 한 후 Southern 분석을 한 결과 여러 copy가 도입된 형질전환체에서 gus 및 35S 프로모터의 재배열 현상이 뚜렷하였다. 또한 일부 계통에서는 methylation 된 유전자를 확인하였고 demethylation 물질인 5-azaC 처리 후에 GUS 발현이 회복되었다. 3. T0에서 여러 copy의 유전자가 도입되어 발현이 없었던 형질전환체의 경우 후대 개체들에서 1 copy를 포함하고 유전자 발현이 정상적인 개체를 선발할 수 있었다.