“一锅法”生物转化富马酸制备L-天冬酰胺

L-天冬酰胺广泛应用于食品、医药、化工合成和微生物培养等领域。目前工业上主要依靠化学合成和直接提取方法制备。该研究首次采用双酶催化富马酸“一锅法”制备L-天冬酰胺。克隆来源于大肠埃希氏菌JM109的天冬酰胺合成酶A基因asnA，并于产三一天冬氨酸酶的E．coliCICC11022S中表达，表达的蛋白分子质量约为37kDa，与预期大小相符，比酶活力为1443．7U／g。利用构建的工程菌E．coliCICC11022S／pET28a（＋）-asnA全细胞高密度催化富马酸生产，L-天冬酰胺，以高效液相色谱法及PITC柱前衍生-高效液相法检测底物、中间产物和终产物，转化10h，富马酸转化率为94．7％，三一天冬酰胺产量可达125．1g／L，生产速率为12．51g／（L·h）。